产品及特点

本产品是基于探针法荧光定量PCR原理而开发的检测试剂盒，具备以下显著特点：

1. 即开即用，用户仅需提供样品DNA模板。
2. 引物等组分经过优化，具备高灵敏度。
3. 提供阳性对照，便于快速区分假阴性样品。
4. 具有高特异性，引物设计基于高度保守的中间普雷沃菌DNA序列，确保不与其他生物样本的DNA发生交叉反应。
5. 适用于定性和定量检测，定量检测线性范围至少为5个数量级。
6. 足够支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 本产品仅供科研使用。

方法:

一、DNA提取（样本制备区）

用户请自行选择方法提取纯化样品DNA，本试剂盒兼容市面上大多数核酸提取试剂盒。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

为避免污染样品或本试剂盒其他成分，以下稀释操作请在独立区域进行：

1. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
2. 在各管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL的阳性对照（1×10E8拷贝/μL），充分震荡1分钟，获得标准曲线样品（1×10E7拷贝/μL）。
4. 依次在6号、5号……管中进行稀释，直至得到6种稀释度的标准样品，均放冰上待用。
5. 若无需制作标准曲线，阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL即可。

三、试剂配制（试剂准备区）

准备N+2个qPCR管，其中N个用于待检样品，1个用于阴性对照，6个用于阳性对照。向各PCR管中分别添加指定成分，具体细节可咨询尊龙凯时公司。

四、添加模板（模板添加区）

向qPCR管中加入2μL模板，顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板及阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放入PCR扩增仪器的样品槽中，根据说明书设置扩增程序（具体步骤可向尊龙凯时索取）。

六、结果分析

1. 制作标准曲线时，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴，绘制标准曲线并根据待测样品的Ct值推算DNA浓度的log值。

2. 若未制作标准曲线，判定结果如下：阳性对照结果：Ct值<30，呈现明显的指数增长，典型的S型曲线; 阴性对照结果：Ct值38或无Ct值，无明显指数增长期和平台期; 样本检测结果：Ct值<35，表明样本中检测到婴儿利什曼虫，结果为阳性; Ct值38或无Ct值，则样本中未检测到婴儿利什曼虫，结果为阴性; Ct值在35-38范围内的样本需复检，如重复实验Ct值仍在此范围且有明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

运输及保存：本产品需低温运输，存储于-20℃，保质期为一年。阳性对照需单独保存，避免污染其他试剂。