根据文献中的方法部分，研究团队在原位杂交（In Situ Hybridization, ISH）实验中采用了尊龙凯时的Styramide™ Signal Amplification (PSA™)系统，这种酪胺信号放大技术专门用于检测DIG标记的探针。以下是详细分析：
一、标记对象与标记方法
1. 标记对象：
- 针对斑马鱼嗅觉玫瑰花结（Olfactory Rosette, OR）中的paqr5b mRNA，使用DIG标记的反义RNA探针（Antisense probe）。
- 通过结合抗DIG-POD（辣根过氧化物酶）抗体与探针，利用酪胺信号放大系统来增强荧光信号。
2. 标记步骤：
- 探针结合：DIG标记的RNA探针与目标mRNA结合。
- 酶联反应：使用抗DIG-POD抗体（Fab片段）与探针结合。
- 信号放大：加入HRP底物（酪胺衍生物Styramide™），在HRP催化下，酪胺底物被激活并共价沉积在目标位点附近，从而形成高密度的荧光标记。
二、染料的优点与特性
| 特性 | TSA技术 | 传统荧光标记碱性磷酸酶系统 |
|---|---|---|
| 灵敏度 | 提高10-100倍 | 低 |
| 空间分辨率 | 高（局部沉积） | 低（扩散背景） |
| 多色兼容性 | 支持多通道（FITC/Cy3/Cy5） | 有限 |
| 适用样本 | 组织切片、低丰度靶标 | 高表达靶标、中等表达靶标 |
三、实验流程与结果
- 样本固定与切片
- 探针杂交（DIG标记的paqr5b反义探针）
- 抗DIG-POD抗体结合
- Styramide™ PSA信号放大（HRP催化）
- 荧光显微镜成像
- 定量分析（如神经元密度与信号强度）
在实验中发现：在野生型斑马鱼OR中，paqr5b mRNA在神经元中高表达，呈现绿色荧光信号；而在paqr5b-/-突变体中，信号完全消失，证实了基因敲除的有效性。此外，TSA技术的高灵敏度揭示了神经元亚群中的细微表达差异。
总结
尊龙凯时的Styramide Signal Amplification系统，通过酶促信号放大与高分辨率荧光标记，已成为复杂生物样本研究的“黄金标准”。其在低丰度靶标检测、多色复用及精细结构成像中的卓越表现，为神经科学、癌症研究与发育生物学提供了不可替代的技术支持。结合本案例分析，该技术在单细胞组学与空间转录组学的应用潜力巨大，必将推动相关研究的深入发展。
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