### 一、细胞培养条件

**细胞名称**：人结肠腺癌细胞LS1034

**生长特性**：贴壁生长

**冻存条件**：无血清冻存液

**培养体系**：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S

**传代方法**：首次传代建议1:2。传代情况：每2天更换培养液。

**备注**：请用无菌离心管收集培养基，以作对比培养使用。如果对比培养效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。

### 二、细胞处理说明

在收到细胞后，请将其培养至良好状态，并灌满完全培养液，封闭瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，并在超净台内按严格的无菌操作流程操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，然后进行后续处理。在显微镜下观察细胞生长情况，并进行不同倍数的拍照保存（最佳拍照倍数为40x、100x、200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认收到状态良好。

### 三、细胞培养步骤

**A. 细胞传代**：

若未超过80%汇合度，收集培养液至离心管中，并保留5ml完全培养基于37℃、5% CO2条件下培养；若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：
1. 弃去培养上清，并用PBS洗涤细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况；当细胞大部分变圆并脱落时，迅速轻敲培养瓶加5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，于1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），并补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

**B. 细胞冻存**：

1. 当细胞生长至覆盖T25培养瓶80%面积时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞变圆后加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落后，转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，将沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液中，混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，若后期需要转入液氮罐，需在-80℃中存放24小时后再转入。

**C. 细胞复苏**：

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至尿管内无结晶，并用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀用5ml完全培养基重悬后接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2条件下继续培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

### 四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能会由于贴壁不牢而发生脱落，这是正常现象。如脱落较多，请将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，并进行1000rpm离心，收集上清作过渡培养（后期对比培养）。沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打并重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应，再离心、弃上清并补充1-2ml完全培养基重悬。最终按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

### 五、售后条款

尊龙凯时在细胞出现问题的情况下，将重发的条件包括但不限于：细胞运输途中问题、细胞污染、活性检测不达标等；对于用户造成的细胞污染、操作不当等情况将不予重发。请在收到产品后及时做出反馈，以确保售后服务质量。