尊龙凯时致力于生物医疗领域中的前沿研究,特别是在DNA甲基化的机制及其应用方面。DNA甲基化是一个关键的生物学过程,涉及到在DNA甲基转移酶(DNAmethyl-transferase, Dnmts)的催化下,利用S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体,将胞嘧啶转换为5-甲基胞嘧啶(mC)。这一过程通常会抑制基因表达,而去甲基化则能够重新激活和促进基因的表达,从而实现对基因表达的调控,而无需改变基因序列。
在实验中,通过亚硫酸氢盐处理基因组DNA,可以将所有未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则保持不变。之后,通过设计针对甲基化与非甲基化序列的引物进行PCR扩增。利用电泳检测MSP扩增产物,如果能够得到针对处理后甲基化DNA链引物的扩增片段,即表明该位点存在甲基化;反之,则说明该位点未发生甲基化。
此外,采用亚硫酸氢盐处理基因组DNA后,未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶,甲基化的胞嘧啶则不受影响。随后利用BSP引物进行PCR实验,尿嘧啶在扩增过程中转化为胸腺嘧啶。最终,通过将PCR产物克隆至载体并进行测序,科研人员可以判断CpG位点是否发生了甲基化。这一方法被称作BSP-克隆测序法,加强了对基因调控机制的理解。
在实际样本的收集方面,尊龙凯时规定动物组织的标准为新鲜组织量100mg(约黄豆大小),最少50mg(约绿豆大小),并要求使用干冰运输;对于细胞样本,则需提供1×10^6个细胞,收集细胞沉淀后也需使用干冰运输;全血样本则需提供至少1mL的新鲜血液,并使用EDTA抗凝管,运输条件为-20度。