肠道类器官作为一种高度模拟真实肠道结构和功能的体外模型，已成为研究肠道生理、病理及疾病机制的重要工具。在培养小鼠肠道类器官的过程中，必须精确控制培养条件和细胞因子的添加，各阶段所需的细胞因子也有所不同。

一、初始培养阶段

在初始培养阶段（干细胞增殖），所用培养基以基础培养基（如DMEM/F-12）为主。：

• 生长因子：Wnt-3a：激活Wnt信号通路，维持干细胞的自我更新；R-spondin-1：增强Wnt信号，促进干细胞增殖；EGF（表皮生长因子）：促进细胞增殖。
• 抑制因子：Noggin：抑制BMP信号，维持干细胞未分化状态。

二、分化诱导阶段

在分化诱导阶段，继续使用DMEM/F-12等基础培养基。此阶段的细胞因子包括：

• ActivinA和FGF2：在分化初期加入，促进内胚层的形成。
• IL-22：在分化中期加入，促进潘氏细胞的分化。
• CHIR99021（GSK3β抑制剂）：用于调控Wnt信号通路，促进细胞分化。

同时可以去除或减少某些增殖因子，例如适当降低EGF的浓度，以减少对细胞增殖的过度刺激。

三、维持与长期培养阶段

在类器官分化完成后，将进入维持与长期培养阶段，此时培养基的调整主要是为了维持类器官的稳定性和功能。基础培养基应继续使用适合的培养基，而维持因子需根据需要调整，比如适当调整Wnt-3a和Noggin的浓度。同时，应逐渐减少或去除ActivinA、FGF2等分化诱导因子。

四、注意事项

在整个培养过程中，注意以下几点：

• 培养基更换频率：通常每2-3天更换一次培养基，以确保营养成分的充足和代谢废物的清除。
• 监测类器官状态：定期观察类器官的形态和生长状态，以及时调整培养条件。
• 无菌操作：整个培养过程需严格遵守无菌操作规范，避免污染。

通过上述阶段性的培养基调整，可以有效诱导小鼠肠道类器官的成功分化，并维持其长期稳定培养。尊龙凯时不仅提供上述小鼠肠道类器官培养所需的基础培养基和细胞因子，还提供现成的小鼠肠道类器官培养基套装3DCultrIntestinalOrganoidGrowthMedium(Mouse)。该产品使用便捷，操作简单，助力您的科研之路。